【据《Virulence》2020年12月报道】题：新生隐球菌线粒体NADH脱氢酶突变导致其对小鼠毒力增强（作者Merryman.M等）
新生隐球菌（CN）可导致免疫系统受损的患者发生真菌性脑膜炎，感染致死率极高，达 18.1万人/22万人次。CN在宿主中存在许多毒力因子如葡醛酸氧甘聚糖（GXM）、黑色素和脲酶的产生、在吞噬细胞内的生存能力等。目前CN的毒力进化研究较少，有研究表明免疫缺陷宿主环境下，CN的线粒体基因发生了微进化，但由于进化压力较小不利于研究。宿主（小鼠、大蜡螟）中连续传代可增强菌株的毒力，但尚未利用大蜡螟固有免疫高水平选择压力建立CN毒力进化模型。本研究旨在探究CN在固有免疫选择下的毒力微进化及其机制。来自美国田纳西州立大学生物系的研究者将CN（H99W）在大蜡螟内连续传代，获得毒力增强株P15。将P15与原代分别感染大蜡螟与线虫，计算存活率；并分别采用吸入与静脉注射的方式感染BALB/c小鼠，检测小鼠存活率、存活时间及各器官真菌负荷反映毒力强弱，同时检测小鼠各器官细胞因子谱研究免疫应答模式。此外，分析两株表型（荚膜）及毒力差异（GXM和黑色素产生情况），并对两株菌进行全基因组测序，分析突变情况（NADH），并通过检测ATP合成情况、代谢率及NADH脱氢酶表达量。
图 P15与 H99W感染小鼠存活时间。（a）吸入感染；（b）静脉注射感染
动物模型结果显示，两株菌对无脊椎动物模型的杀伤力无显著差别，小鼠吸入感染模型P15小鼠存活时间更短，但无显著统计学差异，脾脏真菌负荷较高， P15肺内TNF-α高于H99W，脑内TNF-α含量相反；小鼠静脉感染模型P15毒力较强，脑部真菌负荷高于其他器官，脑内IL-4、IL-10、TNF-α均高于H99W。P15表型较H99W有改变，P15荚膜增大，GXM及黑色素释放更多，巨噬细胞存活时间无差异。基因组分析表明，P15存在5个位点突变，包括线粒体NADH脱氢酶基因启动子区27bp的插入突变，ATP分析得知，P15ATP产生量及代谢率增加，NADH脱氢酶表达量增加。综上所述，大蜡螟模型中连续传代可增强CN的毒力，而NADH脱氢酶表达升高可能是其调控机制。但本研究仅观察到毒力表型的增加，未观察到CN在细胞内复制增加的确切证据。本研究建立的CN-大蜡螟连续传代模型，有助于推动CN在固有免疫下毒力进化的进一步研究。（北华大学刘晓妤 北京协和医院 宁雅婷 徐英春 报道 ）
来源：医学参考报微生物与感染专刊2021年第1期
